مقاله رایگان درمورد شیمیایی و روش ها

در سال (2009) نیز ساچو و همکارانش 9 گونه کلبسیلا از ریزوسفر گندم جدا کردند که براساس تعیین توالی 16srRNA مشخص شده همگی متعلق به جنس کلبسیلاپنومونیه بوده که در این بین تنها 6 گونه کلبسیلا (K8، K11، K17، K30، K23، (K42در شرایط آزمایشگاهی قادر به تولید ایندولاستیکاسید بودند و نتایج نشان داد تولید IAA زمانیکه محیط LB همراه با تریپتوفان بوده افزایش یافته و گونههای K8، K11، K17 و K23 ماکسیمم IAA را در شرایط اپتیمم و بعد از 72 ساعت تولید کردند در حالی که دو گونهK30، K42 ماکسیمم IAA را بعد از48 ساعت تولید میکنند(Sachdev et al ;2009).
Widget not in any sidebars

علاوه بر این واندرساند و همکارانش نیز در همان سال 150 باکتری را از دانه گندم جدا کردند که در شرایط آزمایشگاهی، سنجش آنتیبیوزیس باکتری در برابر بیپولاریسسروکینیانا نشان داد که 43 باکتری بیاثر بوده و 39 باکتری به عنوان آنتاگونیست در حد متوسط موثر بودند که در این بین ایزولههایBR35، OR1 وBRS177 بیشترین پتانسیل را علیه بیپولاریسسروکینیانا داشتند و با تستهای بیوشیمیایی تحت عنوان باسیلوس شناسایی شدندVandersand et al ;2009)).
در سالهای اخیر(2010) سانتویا و همکارانش نشان دادند که سویه سودوموناسفلورسنس ZUM80 اندوفتیک گندم میتوانند پاتوژنهای قارچی گیاه مثل : فوزاریوماگزیسپوروم، کلاتوتریکوملیندماتینوم و
فیتوفتوراسینونامی را از طریق تولید سیدروفور و آنتیبیوتیک مهار کند (Santoya et al ; 2010).
دیلفوزا (2011) با تکنیک کشتدوگانه، اثر آنتاگونیسمی 11 باکتری اندوفیت گندم را بر علیه پاتوژنهای قارچی فوزاریومکلموروم، ریزوکتونیاسولانی و بوتریتیسسینرا مورد بررسی قرار دادند که تنها 5 سویه باسیلوسسوبتیلیس 1، باسیلوسسوبتیلیس 4، باسیلوسلنتوس 28، کوکوریاواریانس 13 و باسیلوسکوهنی 19 اثر آنتاگونیسمی داشته، که علاوه براین دیلفوزا این باکتریها را از لحاظ تولید آنزیمهای خارجسلولی مورد بررسی قرار داد که نتایج حاصله نشان داد، باسیلوسسوبتلیس 4، باسیلوسهالدورنس 12و باسیلوسسوبتیلیس 1 قادر به تولید بتاگلوکاناز و لیپاز بوده و باسیلوسلنتوس 17، باسیلوسکوهنی 19 و باسیلوسسوبتلیس 4 قادر به تولید پکتیناز و سلولاز بودند و باسیلوسلنتوس 28 قادر به تولید پکتیناز بوده است(Dilfuza; 2011).
الیوا و همکارانش (2012) دریافتند که تلقیح باسیلوسپلیمیکسا و آزوسپریلیومبرازیلینسیس به گندم باعث افزایش تولید اکسین و به طور قابل توجه افزایش کروفیلa، کلروفیلb و کاروتنوئید شدند (Eleiwa et al ;2012).
واچووسکا و همکارانش (2013) با بررسی اثر مهاری اسفنگوموناس سویه S11 جدا شده از ریزوسفر و باسیلوس سویه B1 جدا شده از فیلوسفر و مخمرهایی از جنس کریپتوکوکوآلبیدوس، ردوترلاگلوتنیس و ساکارومایسسسروئیس علیه پاتوژنهای قارچی گندم متوجه شدند که تمام مخمرهای مورد آزمایش تنها علیه فوزاریوماسپوروتریکوئیدس اثر مهاری داشته و اسفنگوموناس سویه S11 علیه فوزاریومکلموروم، فوزاریومگرامیناروم، فوزاریومترایسینکتوم و فوزاریوماوناسئوم اثر آنتاگونیسمی نشان داده و باسیلوس سویه B1 توسعه فوزاریوماوناسئوم، فوزاریومکلموروم و فوزاریومترایسینکتوم را کاهش داده است که پاتوژنهای قارچی مورد بررسی فوزاریوماوناسئوم، فوزاریومکلموروم، فوزاریومگرامیناروم، فوزاریوماسپوروتریکوئیدس، فوزاریومترایسینکتوم و فوزاریومپوئی بودهاند(Wachowska et al ; 2013).
فصل سوم
مواد و روش ها
3-1 جداسازی و کشت باکتری اندوفتیک
3-1-1 مواد و وسایل
– بافر NAP (124M m Na2Hpo4.H2o)
– آبمقطر استریل
– اتانول 99%
– هیپوکلریتسدیم 3%
– محیطNA
– هاون
3-1-2 روش کار
3-1-2-1 نمونه و نمونهگیری
ابتدا چند گیاه سالم گندم با ریشه از خاک در آورده و به آزمایشگاه منتقل گردیدند. گیاهان را به آرامی با آب شستوشو داده تا گل و لایشان زدوده شود و سپس به وسیله یک پنس استریل به یک ظرف دیگر منتقل شدند و به قطعات 1 سانتیمتری برش داده شد و به مدت 1 دقیقه در بافرNAP غوطهور شده و بعد با آب مقطر استریل شسته شده که سطح ریشه استریل میشود و در اتانول 99% به مدت 60 ثانیه، هیپوکلریتسدیم 3% به مدت 6 دقیقه، اتانول 99% به مدت 30 ثانیه قرار میدهیم و در انتها چندین بار با آب مقطر استریل شسته شدند تا کاملا سطحشان عاری از مواد ضدعفونیکننده شود. سپس هاون و دستههاون تمیز برداشته درون آن الکل ریخته و شعلهور نموده تا بدین ترتیب استریل و عاری از میکروب شوند. سپس ساقهها و ریشهها را با هاون کوبیده تا کاملا عصارهشان بیرون بیاید و به صورت یک سوسپانسون همگن تبدیل شوند.
3-1-2-2 کشت و شناسایی باکتری
سپس سوسپانسیون حاضر به کمک لوپ استریل به صورت کشت 4 منطقهای در سطح پلیت حاوی محیطکشت، نوترینتآگار کشت داده شدند و سپس پلیتها در دمای 27 درجه سانتیگراد به مدت 72-24 ساعت انکوبه شدند و پس از گذشت زمان مذکور کلنی باکتریهایی که بر روی پلیت ظاهر شدند و از نظر مرفولوژی متفاوت بودند را شمارهگذاری کرده و در طی چند مرحله در زمانهای مختلف بر روی محیط نوترینتآگار، خالصسازی انجام داده شد.
3-2 شناسایی فنوتیپی باکتریهای اندوفتیک
در ادامه از باکتریها لام تهیه شده و رنگآمیزیگرم انجام شد. سپس تستهایی نظیر کاتالاز، سیتوکروماکسیداز، کواگولاز، تستحرکت و تولید اندول، هیدرولیزژلاتین، سیمونسیترات، متیلرد و ووژپروسکوئر، هیدرولیزنشاسته و هیدرولیزکازئین به منظور شناسایی فنوتیپی باکتریهای اندوفیتیک انجام گرفت.

Author: مدیر سایت